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知识大讲堂

>常见问题
基因敲除小鼠检测金标准 ——Southern blot检测
在制备基因敲进和条件性基因敲除模式小鼠过程中,Southern blot检测是非常重要的一步。依据我们大量的数据统?#21697;?#26512;,采用ES细胞方式制备,大约有20%的概率有随机插入;采用CRISPR/Cas9技术,大约有35%的概率有随机插入。而随机插入必须通过Southern blot才能排除。做模式动物的朋友,一定要让你的服务商做Southern blot,否则你大量的时间和金钱?#24230;?#21487;能化为乌有。
基因敲除小鼠三项检测标准
打靶策略和试验方法,在确定设计时就应该是没有什么问题的。拿到基因敲除小鼠的时候需要特别注意问题就是质控标准。基因敲除小鼠制备过程中,检测标准有三项不可缺少:核?#22270;?#27979;、PCR鼠尾检测、Southern检测。 核?#22270;?#27979;是取阳性克隆的细胞,分析细胞的核型。目的是为了排除染色体异常使小鼠出现表型,从而避免试验错误;PCR检测是利用目标片段上、下?#25105;?#29289;,扩增出特定位置条带的反应。验证了目的片段有没有整?#31995;?#23545;应的基因组中。Southern blot杂交是进行基因组DNA特定序列定位的方法,其操作过程是利用电泳分离经酶消化后的DNA片段,然后在将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上,经干烤或者紫外线照射固定,再与相对应结构的DIG标记探针进行杂交,用放射自?#26434;?#25110;酶反应显色,从而检测特定DNA分子的含量。Southern杂交的目的是为了检测目的基因的插入位置及拷贝数量。 如果经过这三项检测,均获得阳性结果,基本就可以确?#31995;?#21040;的基因敲除小鼠基因型是没有问题的。
动物房环境影响小鼠饲养的三大要素
最近好多老师咨询小鼠饲养的问题,还有一些老师想要筹建动物房,经常参加百奥赛图的小鼠饲养培训课程。百奥赛图“海门动物中心”已?#24230;?#20351;用,没有精力饲养小鼠的老师提供大小鼠代养服务。?#25970;矗?#39282;养小鼠需要注意哪些要素呢?下面我们将介绍动物房环境影响小鼠饲养的三大因素,老师们快来对号入座,看看?#32422;?#30340;动物房达标了么? 小鼠天性胆小,?#36164;?#24778;,对外界环境的改变极为敏感,所以动物房的环境对小鼠饲养的影响是最直接?#27169;?#32780;影响因素中最重要的三要素就是动物房的温度、湿度和空气清洁度。温度是影响小鼠生理的一个关键因素,也是饲养小鼠需要重点关注的因素。在一定?#27573;?#20869;,温度变动缓慢,机体可以本能地进行调节与之适应,但变化过大或过急,机体将产生行为和生理不良等影响,影响实验结果。 一般哺乳类实验动物,当温度过低时,常导致性周期的推迟,而温度超过30℃时,雄性动物会出?#37325;和?#33806;缩,产生精子的能力下降;雌性动物会出?#20013;?#21608;期的紊乱,泌乳能力下降或拒绝哺乳,妊娠率下降。因此实验环境温度过高或过低,都能导致机体抵抗力下降,使动物易于患病,影响实验结果的正确性,甚至造成动物死亡。经长期实践,大家发现动物实验时最适宜的环境温度为21~27℃。 湿度是动物房环境影响小鼠饲养的一个重要因素。湿度过高,微生物易于繁?#24120;?#21361;害极大;湿度过低(如低于40%)容易导致?#39029;?#39134;扬,对动物的健康极其不利。空气的相对湿度,也与动物的体温调节有密切关系,在高温情况下影响尤为明显。在低湿度条件下,小鼠和大鼠的哺乳雌鼠常发生吃仔现象,此外仔鼠也常会出现发育不良。所以湿度问题我们需要密切留意。 人类的空气已出了大问题,动物房的空气可不能出一点问题,因为小鼠可比人类?#31185;?#22810;了。空气中氨的含量是衡量空气质量的指标,劳动卫生标准对空气中氨浓度的限度,在实验动物房要求不超过20ppm。动物粪便?#32479;?#20013;产生的臭气中含有H2S ,室内H2S浓度增高会使动物妊娠率下降。此外,浓厚的雄性小鼠汗腺分泌物?#32479;?#27668;,?#19981;?#20351;雌性小鼠性周期紊乱。 因此,动物饲养室和动物实验室的空气应尽量保?#20013;?#40092;,注意通风换气;要求氨浓度小于20ppm,气流速度10~25cm/s,换气?#38382;?0~15次/小时。 另外,光照,噪声以及鼠笼垫料也是动物房环境的重要影响因素。小鼠科研贡献大,饲养也是马虎不得,需要专业的环?#22330;?#19987;业的饲养人员等,实在没有条件?#32422;核?#20859;小鼠的老师,可以寻找有实力、有资质的提供大小鼠代养服务的公司代养!
EGE系统与CRISPR/Cas9技术相比有哪些优势
CRISPR/Cas9技术应用于基因点突变、?敲入时都是基于基因组的同源重组,普通CRISPR/Cas9技术介导的外源DNA的同源重组效率一直很低。而百奥赛图在CRISPR/Cas9技术基础上开发的EGE系统通过一系列的创新和优化,其同源重组效率与普通CRISPR/Cas9技术相比提高了10-20倍,使得基因改造效率更高,生产周期更短,更加快速和方便。
小鼠为什么能成为最好的模式动物
在基础生命科学研究领域,不可或缺的研究工具就是模式动物。所谓模式动物是指用各种方法?#30740;?#35201;研究的生理或病理活动相对稳定地展示出来的标准化的实验动物。一般用于实验的模式动物有很多,例如:斑马鱼、果蝇、大鼠、小鼠?#21462;?#20854;中,最好、使用最广泛的模式动物是小鼠。?#25970;?#23567;鼠为什么能成为最好的模式动物呢?这主要取决于以下四方面; 1、 小鼠的基因组计划已基?#23601;?#25104;。基因组序列的大量信息为研究基因功能及其表达调控、胚胎发育和人类疾病的分子机制提供了条件基础?#22270;?#26415;手段; 2、 小鼠生理生化和发育过程和人类相似,基因组和人类98%同源,所以很多小鼠疾病模型可以基本上真实的模拟人类疾病的发病过程及对药物的反应; 3、 小鼠的基因改造技术成熟;?#30001;鲜蘭推?#20843;十年代基因改造技术诞生以来到最新的技术突破,基因改造技术在小鼠模型构建方面日趋完善。美国科学家MarioR.Capecchi、OliverSmithies和英国科学家MartinJ.Evans因“涉及使用胚胎干细胞进行小鼠特定基因修饰方面的一系?#22411;?#30772;性发 现” 而获得2007年度诺贝尔生理学或医学奖。 4、小鼠繁殖能力强,性成熟早,体型小巧且易于管理,用于实验更加方便快捷。
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